一、准备工作
微柱凝胶试剂卡的准备:观察外观,如有干胶、杂质、气泡不可使用,之后将卡放置室温(18-25℃)平衡,再用专用离心机离心5分钟。
(二)检测标本的准备:
1.红细胞悬液的制备:将受血者与献血者的红细胞和血浆分离,各取其压积红细胞10ul,分别加入含1.0-1.2毫升红细胞稀释液的两个试管中,外观应为均匀淡红色,无絮状物和血块。
2.血清标本的制备:采集被检对象静脉血,放入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中,10分钟后离心,取上清。
二、操作步骤
1.将准备好的抗人球蛋白交叉配血卡做好标记。
2.将献血者红细胞悬液1滴(或50μl)与受血者血清1滴(或50μl)先后加入主侧管中。
3.将受血者红细胞悬液1滴(或50μl)与献血者血清1滴(或50μl)先后加入次侧管中。
4.加样后的试剂卡,置37℃孵育器中孵育15分钟。
5.使用专用离心机离心5分钟(900rpm2分钟,1500 rpm3分钟),取出肉眼观察结果。
结果判定:
1.阴性结果:红细胞完全沉降于凝胶管底部,表明受血者与献血者血型相合。
2.阳性结果:红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中,表明受血者与献血者血型不相合。
三、注意事项
1.应用直接抗人球蛋白微柱凝胶免疫试验检测病人红细胞时,一定要用适量EDTA的试管采血液标本,该标本不能放入4℃-10℃冰箱保存,以避免红细胞在病人体外致敏所致假阳性反应。
2.红细胞标本一定不能被细菌污染,否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。如不得不用过夜血或陈旧血,则必须首先用该标本做阴性对照试验,以确定该标本是否可以做本实验。
3.血清标本:血清标本必须充分去纤维蛋白,否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出,阻碍阴性红细胞沉淀,呈假阳性反应。
4.如在微柱凝胶管中出现溶血现象,强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应,也不排除其他原因所致溶血,故对此标本一定认真分析,并向上级主管技术人员报告并讨论其原因。
5.每日试验前,先取出微柱凝胶卡放置至室温。
6.试剂卡应放在18-25℃储存,如若长期放在4℃冰箱,建议每1-2个月取出,用专用离心机离心一次,以防止干胶或产生气泡。